رویه‌های استانداردسازی اتاق استریل و مشخصات پذیرش

۱. هدف: این دستورالعمل با هدف ارائه یک رویه استاندارد برای عملیات آسپتیک و محافظت از اتاق‌های استریل تدوین شده است.

۲. دامنه کاربرد: آزمایشگاه آزمایش‌های بیولوژیکی

۳. شخص مسئول: سرپرست کنترل کیفیت، آزمایشگر

۴. تعریف: هیچکدام

۵. اقدامات احتیاطی ایمنی

برای جلوگیری از آلودگی میکروبی، عملیات آسپتیک را به شدت انجام دهید؛ اپراتورها باید قبل از ورود به اتاق استریل، لامپ UV را خاموش کنند.

۶. رویه‌ها

۶.۱. اتاق استریل باید به یک اتاق عمل استریل و یک اتاق بافر مجهز باشد. تمیزی اتاق عمل استریل باید به کلاس ۱۰۰۰۰ برسد. دمای داخل اتاق باید بین ۲۰ تا ۲۴ درجه سانتیگراد و رطوبت بین ۴۵ تا ۶۰ درصد حفظ شود. تمیزی میز کار تمیز باید به کلاس ۱۰۰ برسد.

۶.۲ اتاق استریل باید تمیز نگه داشته شود و برای جلوگیری از آلودگی، انباشته کردن زباله اکیداً ممنوع است.

۶.۳. از آلودگی تمام تجهیزات استریلیزاسیون و محیط‌های کشت اکیداً جلوگیری کنید. آنهایی که آلوده شده‌اند باید استفاده از آنها را متوقف کنند.

۶.۴ اتاق استریل باید مجهز به مواد ضدعفونی‌کننده با غلظت مناسب مانند محلول ۵٪ کرزول، ۷۰٪ الکل، ۰.۱٪ محلول کلرمتیونین و غیره باشد.

۶.۵. اتاق استریل باید به طور منظم استریل و با مواد ضدعفونی کننده مناسب تمیز شود تا از تمیزی اتاق استریل مطابق با الزامات اطمینان حاصل شود.

۶.۶ تمام وسایل، ابزار، ظروف و سایر مواردی که باید به اتاق استریل آورده شوند، باید محکم بسته‌بندی شده و با روش‌های مناسب استریل شوند.

۶.۷ قبل از ورود به اتاق استریل، کارکنان باید دست‌های خود را با صابون یا مواد ضدعفونی‌کننده بشویند و سپس در اتاق بافر لباس کار مخصوص، کفش، کلاه، ماسک و دستکش بپوشند (یا دوباره دست‌های خود را با اتانول ۷۰٪ پاک کنند). قبل از ورود به اتاق استریل، عملیات را در محفظه باکتری انجام دهند.

۶.۸. قبل از استفاده از اتاق استریل، لامپ فرابنفش در اتاق استریل باید بیش از ۳۰ دقیقه برای تابش و استریل کردن روشن شود و همزمان میز تمیز برای دمیدن هوا روشن شود. پس از اتمام عمل، اتاق استریل باید به موقع تمیز شده و سپس به مدت ۲۰ دقیقه با نور فرابنفش استریل شود.

۶.۹. قبل از بازرسی، بسته‌بندی بیرونی نمونه آزمایشی باید دست‌نخورده باقی بماند و برای جلوگیری از آلودگی نباید باز شود. قبل از بازرسی، از پنبه‌های آغشته به الکل ۷۰٪ برای ضدعفونی کردن سطح بیرونی استفاده کنید.

۶.۱۰ در طول هر عمل، باید یک کنترل منفی برای بررسی قابلیت اطمینان عملیات آسپتیک انجام شود.

۶.۱۱. هنگام جذب مایع باکتریایی، باید از یک توپ مکش برای جذب آن استفاده کنید. نی را مستقیماً با دهان خود لمس نکنید.

۶.۱۲. سوزن تلقیح باید قبل و بعد از هر بار استفاده توسط شعله استریل شود. پس از خنک شدن، کشت را می‌توان تلقیح کرد.

۶.۱۳ نی‌ها، لوله‌های آزمایش، پتری دیش‌ها و سایر وسایل حاوی مایع باکتریایی باید در یک سطل استریلیزاسیون حاوی ۵٪ محلول لیزول برای ضدعفونی خیسانده شوند و پس از ۲۴ ساعت خارج و آبکشی شوند.

۶.۱۴ اگر مایع باکتریایی روی میز یا زمین ریخته شده است، باید بلافاصله محلول ۵٪ اسید کربولیک یا ۳٪ لایسول را حداقل به مدت ۳۰ دقیقه روی محل آلوده بریزید و سپس آن را ضدعفونی کنید. هنگامی که لباس کار و کلاه به مایع باکتریایی آلوده شده‌اند، باید بلافاصله آنها را درآورده و پس از استریل کردن با بخار پرفشار، بشویید.

۶.۱۵ تمام اقلام حاوی باکتری‌های زنده باید قبل از شستشو زیر شیر آب ضدعفونی شوند. آلوده کردن فاضلاب اکیداً ممنوع است.

۶.۱۶. تعداد کلنی‌ها در اتاق استریل باید ماهانه بررسی شود. در حالی که میز تمیز باز است، تعدادی پتری دیش استریل با قطر داخلی ۹۰ میلی‌متر بردارید و حدود ۱۵ میلی‌لیتر محیط کشت آگار مغذی را که ذوب شده و تا حدود ۴۵ درجه سانتیگراد سرد شده است، به صورت آسپتیک به آن تزریق کنید. پس از جامد شدن، آن را به صورت وارونه در دمای ۳۰ تا ۳۵ درجه سانتیگراد قرار دهید. به مدت ۴۸ ساعت در انکوباتور ℃ انکوبه کنید. پس از اثبات استریل بودن، ۳ تا ۵ پلیت بردارید و آنها را در سمت چپ، وسط و راست محل کار قرار دهید. پس از باز کردن پوشش و قرار دادن آنها به مدت ۳۰ دقیقه، آنها را به صورت وارونه در انکوباتور ۳۰ تا ۳۵ درجه سانتیگراد به مدت ۴۸ ساعت قرار دهید و آنها را بیرون بیاورید. بررسی کنید. میانگین تعداد باکتری‌های متفرقه روی پلیت در یک منطقه تمیز کلاس ۱۰۰ نباید از ۱ کلنی تجاوز کند و میانگین تعداد در یک اتاق تمیز کلاس ۱۰۰۰۰ نباید از ۳ کلنی تجاوز کند. اگر از حد مجاز تجاوز شود، اتاق استریل باید کاملاً ضدعفونی شود تا بازرسی‌های مکرر الزامات را برآورده کند.

۷. به فصل (روش بازرسی استریل) در «روش‌های بازرسی بهداشتی دارو» و «شیوه‌های عملیاتی استاندارد چین برای بازرسی دارو» مراجعه کنید.

۸. دپارتمان توزیع: دپارتمان مدیریت کیفیت

راهنمای فنی اتاق تمیز:

پس از به دست آوردن یک محیط استریل و مواد استریل، باید حالت استریل را حفظ کنیم تا بتوانیم یک میکروارگانیسم شناخته شده خاص را مطالعه کنیم یا از عملکردهای آنها استفاده کنیم. در غیر این صورت، میکروارگانیسم‌های مختلف از خارج می‌توانند به راحتی با هم مخلوط شوند. پدیده اختلاط میکروارگانیسم‌های نامربوط از خارج، در میکروبیولوژی، باکتری‌های آلوده کننده نامیده می‌شود. جلوگیری از آلودگی یک تکنیک حیاتی در کار میکروبیولوژیکی است. استریلیزاسیون کامل از یک سو و جلوگیری از آلودگی از سوی دیگر، دو جنبه از تکنیک آسپتیک هستند. علاوه بر این، باید از فرار میکروارگانیسم‌های مورد مطالعه، به ویژه میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا یا میکروارگانیسم‌های مهندسی ژنتیکی شده که در طبیعت وجود ندارند، از ظروف آزمایشگاهی خود به محیط خارجی جلوگیری کنیم. برای این اهداف، در میکروبیولوژی، اقدامات زیادی وجود دارد.

اتاق استریل معمولاً اتاق کوچکی است که به طور خاص در آزمایشگاه میکروبیولوژی ساخته می‌شود. می‌توان آن را با ورق و شیشه ساخت. مساحت آن نباید خیلی بزرگ باشد، حدود ۴-۵ متر مربع و ارتفاع آن حدود ۲.۵ متر باشد. یک اتاق بافر باید در خارج از اتاق استریل ایجاد شود. درب اتاق بافر و درب اتاق استریل نباید در یک جهت باشند تا از ورود باکتری‌های متفرقه توسط جریان هوا جلوگیری شود. هم اتاق استریل و هم اتاق بافر باید هوابند باشند. تجهیزات تهویه داخلی باید دارای دستگاه‌های تصفیه هوا باشند. کف و دیوارهای اتاق استریل باید صاف، مقاوم در برابر نفوذ گرد و غبار و به راحتی تمیز شوند. سطح کار باید تراز باشد. هم اتاق استریل و هم اتاق بافر به چراغ‌های ماوراء بنفش مجهز هستند. چراغ‌های ماوراء بنفش در اتاق استریل ۱ متر از سطح کار فاصله دارند. کارکنانی که وارد اتاق استریل می‌شوند باید لباس و کلاه استریل بپوشند.

در حال حاضر، اتاق‌های استریل عمدتاً در کارخانه‌های میکروبیولوژی وجود دارند، در حالی که آزمایشگاه‌های عمومی از میز تمیز استفاده می‌کنند. عملکرد اصلی میز تمیز، استفاده از دستگاه جریان هوای آرام برای حذف گرد و غبارهای ریز مختلف از جمله میکروارگانیسم‌های روی سطح کار است. این دستگاه الکتریکی اجازه می‌دهد هوا از فیلتر هپا عبور کرده و سپس وارد سطح کار شود، به طوری که سطح کار همیشه تحت کنترل هوای استریل در حال جریان است. علاوه بر این، یک پرده هوای پرسرعت در سمت نزدیک به بیرون وجود دارد تا از ورود هوای باکتریایی خارجی جلوگیری شود.

در مکان‌هایی با شرایط دشوار، می‌توان از جعبه‌های استریل چوبی نیز به جای میز تمیز استفاده کرد. جعبه استریل ساختار ساده‌ای دارد و جابجایی آن آسان است. دو سوراخ در جلوی جعبه وجود دارد که در صورت عدم استفاده، توسط درهای فشاری-کششی مسدود می‌شوند. می‌توانید در حین کار، دستان خود را به داخل بکشید. قسمت بالایی جلوی جعبه به شیشه مجهز شده است تا عملکرد داخلی را تسهیل کند. یک لامپ فرابنفش در داخل جعبه وجود دارد و ظروف و باکتری‌ها را می‌توان از طریق در کوچک کناری وارد کرد.

تکنیک‌های عملیاتی آسپتیک در حال حاضر نه تنها نقش محوری در تحقیقات و کاربردهای میکروبیولوژیکی ایفا می‌کنند، بلکه به طور گسترده در بسیاری از بیوتکنولوژی‌ها نیز مورد استفاده قرار می‌گیرند. به عنوان مثال، فناوری تراریخته، فناوری آنتی‌بادی مونوکلونال و غیره.